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Diagnóstico laboratorial mediante la toma de fluidos orales en ganado porcino
20 November 2015El trabajo realizado alrededor de la toma de saliva (fluidos orales) de los cerdos con cuerdas de algodón para el diagnóstico de enfermedades se basa en que el manejo del ganado para la extracción de los sueros porcinos conlleva toda una costosa metodología, requiere mucho tiempo y al menos la participación de dos personas, el veterinario y un ayudante.
Artículo de Jesús M. Lamana, Asesor Veterinario, España.
La extracción de la sangre en las cerdas es mediante punción de la vena cava, por lo que una persona tiene que sujetar las cerdas por el morro con un lazo y en los verracos de los centros de inseminación (CIA) esto no se puede hacer debido a su fuerza y podrían herir al operario. En lechones se extrae la sangre también de la vena cava por lo que el operario tiene que poner boca abajo al lechón y sujetar las patas para poder acceder con la aguja a la vena cava.
En el ganado porcino trabajamos con poblaciones muy grandes de cerdas, lechones, cebones, centros de inseminación de grandes dimensiones, por lo que los muestreos ya sean para enfermedades legisladas, por interés epidemiológico o para hacer seroperfiles de forma particular son bastante amplios.
Alternativa a la serología
Una alternativa a la serología sería la de la toma de los fluidos orales, lo cual no implica hacer desaparecer a ésta pero se podrían complementar las dos técnicas. En el caso de lechones con una edad de menos de 5 semanas de vida, en condiciones comerciales, se asustan de la cuerda y no la muerden, en lactación tampoco se puede obtener el fluido oral por lo que en estas edades se tendrá que seguir realizando la serología convencional.
Así mismo ésta técnica no es válida para todas las enfermedades porcinas, luego citaré en las que se puede realizar la técnica de extracción de fluidos orales, por lo tanto hay que tener en cuenta estas limitaciones.
Por los trabajos hechos en medicina humana se sabe que hay una correlación entre la muestra de saliva y la serología en ciertas enfermedades, una de ella es el virus VIH.
La saliva es un fluido oral complejo que tiene componentes enzimáticos con fines nutricionales, otros que provienen de la mucosa de la boca y de los tejidos de la zona donde hay un trasudado pasivo desde el sistema circulatorio y en cuya composición hay diversas inmunoglobulinas como respuesta a todo tipo de antígenos, víricos o bacterianos. También hay células defensivas a partir de los tejidos linfoides regionales y provenientes de la sangre.
En los fluidos orales por lo tanto se pueden encontrar anticuerpos de todos los tipos, por lo que las técnicas específicas laboratoriales pueden determinar y estudiar las infecciones en el tiempo. Hay patógenos que penetran en el organismo del cerdo por vía oral por lo que se podrá demostrar los anticuerpos en la saliva y otras veces se detectarán por una multiplicación orgánica y a través del sistema circulatorio llegarán a la cavidad bucal.
En el laboratorio la determinación de los antígenos en los fluidos orales se realiza mediante la técnica de la PCR (reacción en cadena de la polimerasa) y con algunas modificaciones como la PCR-RT a tiempo real.
Las muestras orales deben de recogerse con cuerdas de algodón ya que otros materiales no han sido tan efectivos como los derivados plásticos, éstos no tienen influencia para realizar la técnica del ELISA, pero sí para la PCR. Estamos trabajando con ésta técnica de los fluidos sobre todo para la detección del virus PRRS con muy buenos resultados comparables a la serología.
Monitorizamos los lechones destetados en las granjas positivas a virus PRRS, para saber en qué momento se infectan es decir son PCR positivos y también se puede cuantificar la carga viral, que va de 1 a 3. Estudios referentes a cerdas de reemplazo para saber si están o no infectadas, ya que nuestra política de entrada de reposición es la de comprar cerdas negativas a virus PRRS aunque la granja sea positiva estable con respecto al virus.
Esta técnica de los fluidos es muy interesante en el caso de la influenza porcina ya que este virus no produce viremia y no se puede detectar en suero sanguíneo, sin embargo se puede detectar en el laboratorio bien por aislamiento o por la prueba de PCR-RT.
Esta técnica de obtención de fluidos es de bajo coste, la puede poner en marcha los propios operarios de la granja y por lo tanto se puede hacer una recogida más continuada de muestras, muy interesante para los estudios de tipo epidemiológico. En el caso de los verracos de los CIA es crítica porque se puede obtener una muestra individual de cada uno sin ningún riesgo personal al tener que sujetar al animal.
Obtención de fluidos orales
La metodología es muy sencilla se ata bien la cuerda en el lateral del corral donde están los animales dejándola caer sin que toque el suelo, la cuerda no debe de ensuciarse en exceso porque luego puede interferir en el diagnóstico. De esta manera con lo curiosos que son los cerdos todo el grupo morderá sistemáticamente la cuerda, otra ventaja de la técnica es que se obtiene un pool de muestras porque son todos los animales del corral los que muerden la cuerda. El tiempo mínimo que debe permanecer las cuerdas en los compartimentos es de unos 30 minutos.
El Kit se compone de unos guantes de nitrilo que deben de utilizarse únicamente para una muestra, luego desecharlos. Una bolsa de plástico amplia donde se mete la cuerda y poderla retorcer dentro del envase y pasar el líquido, previo corte con una tijera, a un frasco estéril de una capacidad de 20 a 25 ml con fondo cónico y tapón enroscable, éste es el que se enviará por correo urgente al laboratorio en una caja de porexpan y con placas de frío lo antes posible. Cada kit lleva un folleto con la dirección del laboratorio y espacio para escribir en él todo tipo de datos, edad de los animales, vacunaciones, pruebas a realizar, etc.
La toma de muestras de saliva puede servir para el diagnóstico de las siguientes patologías del ganado porcino:
| Enfermedades de tipo vírico | Enfermedades bacterianas |
|---|---|
| Virus PRRS |
Streptococcus suis tipo 2
|
| Influenza porcina |
Escherichia coli
|
| Enfermedad de Aujeszky |
Actinobacillus pleuroneumoniae
|
| Peste porcina clásica |
Micoplasmas
|
| Fiebre aftosa |
Hemophilus parasuis
|
| Circovirus porcino tipo -2 |
En algunas de estas enfermedades se puede aislar el virus o la bacteria, en otras los anticuerpos por medio de la técnica ELISA y en el caso del virus PRRS por una PCR-RT cuantitativa.
Lógicamente la técnica de los fluidos orales supone una reducción de costes, es fácil de ponerla en marcha por lo que influirá en los planes de control y erradicación de las enfermedades porcinas. No desaparecerá la serología convencional pero es la técnica es una realidad y ayudará a los ganaderos y veterinarios clínicos a realizar este tipo de trabajo.
Bibliografía
Seddon YM y cols. Optimising oral fluid collection from groups of pigs: effect of housing system and provision of ropes Vet.J. 2012 Jul; 193.
Prickett y cols. The development of oral fluid-based diagnostics and applications in veterinary medicine. Animal Health Res Rev. 2010 Dec 11.
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